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牛布氏杆菌酶联免疫分析!

放大字体  缩小字体 发布日期:2020-06-28   来源:中国微生物菌种查询网   作者:百欧博伟 查看手机版   浏览次数:160
牛布氏杆菌酶联免疫分析!一、通用名:牛布氏杆菌酶联免疫分析试剂盒二、使用目的:本试剂盒用于测定牛血清、血浆、或其它组织液中布氏杆菌的含量。三、实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本
         牛布氏杆菌酶联免疫分析!

一、通用名:牛布氏杆菌酶联免疫分析试剂盒

二、使用目的:本试剂盒用于测定牛血清、血浆、或其它组织液中布氏杆菌的含量。

三、实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛布氏杆菌水平。用纯化的布氏杆菌抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入布氏杆菌,再与HRP标记的布氏杆菌抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的布氏杆菌呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛布氏杆菌浓度。

四、试剂盒组成

⒈20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶

⒉酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(270ng/L) 0.5ml×1瓶

⒊酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶

⒋样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份

⒌显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张

⒍显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个

五、标本要求

⒈标本采集后尽早进行实验。血清、血浆可以直接检测

⒉组织:按相关文献提取后,取上清液待测

⒊不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

⒋可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

六、操作步骤

⒈标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为(180 ng/L ,120 ng/L, 60 ng/L,30 ng/L, 15 ng/L)。

⒉加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

⒊温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

⒋配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

⒌洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

⒍加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

⒎温育:操作同3。

⒏洗涤:操作同5。

⒐显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

⒑终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

⒒测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

七、计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

八、注意事项

⒈试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

⒉浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

⒊各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

⒋请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

⒌严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准

⒍底物请避光保存。

⒎封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

⒏所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

⒐本试剂不同批号组分不得混用。

⒑如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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